O teste de microimunofluorescência detecta anticorpos da classe lgM e lgG, e constitui o método mais sensível e específico para o diagnóstico.

O diagnóstico é essencialmente clínico, porém o exame microscópico de raspado celular da lesão é bastante sensível enquanto a sorologia tem se revelado pouco sensível.

Os quadros de úlcera, erosão, uretrites e proctite são descritos como manifestações da fase tardia e em pacientes expostos por intercurso anal passivo. Nesses casos, o diagnóstico deve ser feito por exame microscópico direto do raspado de células coradas pelo Giemsa à procura de inclusões típicas.

Os títulos da reação de fixação de complemento são mais altos nos quadros causados por Chlamydia trachomatis sorotipo D-K do que pelos sorotipos L 1, L2 e L3.

O teste intradérmico de Frei pode ser utilizado e o hemograma apresenta leucocitose discreta com linfocitose e monocitose relativas.